PRM（PARALLEL REACTION MONITORING）靶向蛋白質組學
產品簡介
PRM（parallel reaction monitoring）靶向蛋白質組學是一項基于質譜檢測的全新精準靶向定量技術，具有特異性強、靈敏度高、準確性高等特點。
技術優勢
PRM技術適用性廣，無物種限制，且通量高，可一次性檢測20-100個目標蛋白質，極大節省樣本及實驗成本。
靈敏度高，可達ppm級別，線性范圍可達5-6個數量級。
特異性高，可精細區分亞型、修飾位點、突變位點等精細序列差異。
PRM靶向蛋白質組學與Western Blot對比
Western Blot | PRM | |
實驗原理 | 抗原抗體結合，通過通過檢測抗體含量間接獲得目的蛋白表達量 | 通過質譜對目標蛋白質的肽段進行選擇性監測和碎裂分析，對目標蛋白進行定量 |
檢測范圍 | 依賴抗體特異性，有物種限制 | 無物種限制 |
檢測通量 | 1個目標蛋白/次 | 20-100個目標蛋白/次 |
重復性 | 人工操作，干擾因素多 | 標準化儀器操作，可重復性好 |
儀器平臺
Thermo Q Exactive HF（X）
服務流程
推薦組合產品
DIA+PRM
PRM送樣建議
| 樣本類型 | 推薦起始量 | 建議樣品處理流程 |
細胞 | >5×106
| 貼壁細胞 1.傾掉培養基，用PBS清洗3次，加入胰酶； 2.消化好的細胞轉入EP管，室溫3000 g離心5 min，棄掉上清； 3.PBS清洗3次，上清吸凈，細胞沉淀立即-80℃冰箱儲存。 或者 1.傾掉培養基，用PBS清洗3次后加入裂解液； 2.細胞刮刮細胞培養板，收集細胞裂解液，立即-80℃冰箱儲存。 懸浮細胞 1. 3000×g離心5min收集細胞沉淀； 2.PBS清洗3次，立即-80℃冰箱儲存。 |
動物組織 | >15mg | 1.取目標部位組織，迅速取材且大小均一，將組織切成0.5cm左右的小塊； 2.組織小塊浸入PBS，洗掉組織中殘留的血； 3.用無塵紙吸凈表面的液體，立即-80℃冰箱儲存。 |
植物組織 | >50mg | 1.選取干凈的目標部位組織，迅速取材且保證取材均一；將組織剪成0.5cm左右的小塊； 2.組織立即-80℃冰箱儲存。 |
微生物 | >20mg | 1.收集菌體培養物，3000g離心5min，棄掉培養基； 2.PBS清洗3次，保留細菌沉淀，-80℃冰箱儲存。 |
血清/血漿 | >50μL | 血清 取普通采血管收集血液，室溫靜置，上層洗出的液體即為血清。 血漿 取抗凝采血管收集血液，使血液與管壁充分接觸，1000×g 4℃離心10-15min,上層即為血漿。 |
案例分析
顱內動脈瘤（Intracranial aneurysm，IA）是一種人群內發病率較高的疾病，占到普通人群的2-3%。目前針對IA的診斷，尚依賴于影像學判斷如數字減影血管造影（DSA），但DSA成本高、效率低，且DSA檢查的有創性和形態學參數的寬泛性并不適合精準醫學的要求。而目前針對IA，尚無可用于預測的標志物。
復旦大學劉曉慧課題組在EMBO Molecular Medicine雜志在線發表一篇題為：Circulating proteomic panels for risk stratification of intracranial aneurysm and its rupture的論文，通過DIA+PRM的全面血清標志物篩選及驗證方法，揭示了可能存在的顱內動脈瘤臨床血清標志物以及疾病發生發展可能的機制。
研究者首先針對IA的手術切除組織和血清開展系統的DIA蛋白質組學研究，建立了目前已報導鑒定量全面的動脈瘤組織和血清輪廓譜，在組織和血清中分別鑒定到5915個蛋白質和1557個蛋白質，分別找到724個差異蛋白和144個差異蛋白。在此基礎上，在大規模血清隊列中進行PRM驗證，構建了一個全面的IA潛在血清蛋白質標志物數據庫。
